令人愤怒的技术供应方

2010年12月8日 星期三

第八因子纯化困难重重，做了好几个系列了，还没能够到达第五步阳离子交换。

第一步阴离子交换和第二步免疫亲和用的是组氨酸缓冲液；第三步阴离子交换用的是磷酸缓冲液，但平衡液中含有甘氨酸。第三步的上的是第二部的洗脱液，所以样品中含有组氨酸，如果第三步上样后不充分洗涤就不能避免洗脱液中含有组氨酸，但如果洗涤之后不进行预洗是不能除去洗脱液中的甘氨酸的；因为组氨酸和甘氨酸的影响，在第四步IMAC时，上样就直接造成柱子上的二价铜离子脱落，样品损失，无法到达纯化目的，无法进行接下来的阳离子交换层析。

公司从某人某单位买来的技术，太不成熟，我甚至怀疑他们自己做过没有，很多问题我们发现了，他们有恍然大悟的感觉，比如说第三步阴离子交换的缓冲液，加10mM 氯化钙时会产生磷酸钙沉淀，讨论之后又改为1mM氯化钙了。铜离子脱落的问题更让我们恼火，难道你们就没发现这个明显的问题？缓冲液中的氨基酸的羧基或氨基肯定会造成铜离子的脱落。

暂时的解决方案：第三步阴离子交换层析洗脱前加一步预洗脱先充掉甘氨酸。